El m\u00e9todo de descompresi\u00f3n de nitr\u00f3geno est\u00e1 particularmente bien adaptado para el tratamiento de c\u00e9lulas de mam\u00edferos y otras limitadas por membrana. Tambi\u00e9n se ha utilizado con \u00e9xito para el tratamiento de las c\u00e9lulas de plantas, para liberar el virus de huevos fertilizados y para el tratamiento de bacterias fr\u00e1giles. No se recomienda para las c\u00e9lulas bacterianas sin tratar, pero esta restricci\u00f3n puede ser eliminada mediante el uso de diversos procedimientos de pre tratamiento para debilitar la pared celular. La levadura, hongos, esporas y otros materiales, con paredes resistentes no responden bien a este m\u00e9todo.<\/p>\n
Hunter y Commerford (1) <\/strong>publicaron un art\u00edculo en 1961, que se ha convertido en “recetario” b\u00e1sico para la rotura de los tejidos de mam\u00edferos, por el m\u00e9todo de descompresi\u00f3n de nitr\u00f3geno. Aunque la mayor parte del trabajo descrito por estos autores se hizo con tejido de rata, tambi\u00e9n trataron bazo, c\u00e9lulas blancas, ganglios linf\u00e1ticos, tumores, timo y otros tejidos para establecer la aplicabilidad general del m\u00e9todo. Sus resultados demostraron claramente que las c\u00e9lulas pueden romperse por este m\u00e9todo con m\u00ednimo da\u00f1o f\u00edsico y qu\u00edmico de los componentes.<\/p>\n H y C obtuvieron la rotura completa a presiones de 1300 psi o m\u00e1s, mientras que las presiones por debajo de 700 psi dejaron c\u00e9lulas enteras y grupos de c\u00e9lulas en el homogeneizado. A presiones entre 800 y 1000 psi, se produjeron homogenizados de c\u00e9lulas libres con los n\u00facleos intactos. Se utiliz\u00f3 una prensa de mano para pre-picar los tejidos antes del tratamiento en el recipiente. Se encontr\u00f3 que la condici\u00f3n de los n\u00facleos era dependiente de la composici\u00f3n de la soluci\u00f3n buffer de suspensi\u00f3n. Se obtuvieron buenos resultados con el uso de soluciones isot\u00f3nicas mientras que se observaron n\u00facleos con inflamaci\u00f3n y rotura en c\u00e9lulas suspendidas en soluciones muy diluidas. Esto se atribuy\u00f3 a la inflamaci\u00f3n osm\u00f3tica que H y C encontraron que podr\u00eda ser controlada mediante la adici\u00f3n de sales inorg\u00e1nicas tales como cloruro de sodio o solutos org\u00e1nicos como sacarosa o glicerol. Los n\u00facleos eran extremadamente fr\u00e1giles cuando el medio de suspensi\u00f3n no conten\u00eda calcio, pero se encontr\u00f3 que la presencia tan s\u00f3lo 0.0002M de cloruro de calcio estabiliza los n\u00facleos. El acetato de magnesio tambi\u00e9n es \u00fatil para este prop\u00f3sito.<\/p>\n Para determinar la extensi\u00f3n del da\u00f1o a las c\u00e9lulas l\u00e1biles, H y C estudiaron Deoxyribonucleo prote\u00edna, DNP, debido a su susceptibilidad a los agentes qu\u00edmicos y al estr\u00e9s f\u00edsico, obteniendo recuperaciones de m\u00e1s del 90% de DNP de la fracci\u00f3n nuclear con excelente conservaci\u00f3n del material. Tambi\u00e9n compararon las actividades enzim\u00e1ticas de suspensiones mitocondriales preparados por el m\u00e9todo de descompresi\u00f3n de nitr\u00f3geno con suspensiones producidas en un homogeneizador PotterElvehjem. No se detectaron diferencias en la actividad de las enzimas.<\/p>\n Dowben, Gaffey y Lynch (2) <\/strong>usaron la t\u00e9cnica de descompresi\u00f3n de nitr\u00f3geno para preparar poli ribosomas a partir de c\u00e9lulas L, fibroblastos, c\u00e9lulas fetales humanas de l\u00edquido amni\u00f3tico, h\u00edgado de rata y m\u00fasculo de embriones de pollo. Usando una presi\u00f3n de 600 psi obtuvieron algo m\u00e1s del 99.9% de ruptura y recuperaron m\u00e1s del 95% de los n\u00facleos intactos. El rendimiento de polisomas fue dos a tres veces mayor que cuando las c\u00e9lulas se homogeneizaron en un triturador de tejidos Dounce. Adem\u00e1s, tuvieron perfiles mejor definidos y m\u00e1s reproducibles. Tambi\u00e9n se reportaron actividades significativamente mayores seg\u00fan lo determinado por la incorporaci\u00f3n de amino\u00e1cidos.<\/p>\n Short, Maines y Davis (4) <\/strong>compararon el m\u00e9todo de descompresi\u00f3n de nitr\u00f3geno con morteros PTFE y homogeneizadores de tubo de vidrio tipo Potter-Elvehjem para la preparaci\u00f3n de las fracciones microsomales para estudios de metabolismo del f\u00e1rmaco. El m\u00e9todo de descompresi\u00f3n produjo consistentemente m\u00e1s del doble de prote\u00edna microsomal por gramo de tejido, que el mortero y el fraccionamiento del tubo. Se encontr\u00f3 que las actividades enzim\u00e1ticas por miligramo de prote\u00edna microsomal eran esencialmente el mismo para ambos m\u00e9todos, pero se debe recordar que la descompresi\u00f3n de nitr\u00f3geno produjo m\u00e1s del doble de prote\u00edna microsomal por gramo de material inicial.<\/p>\n En el examen microsc\u00f3pico se encontr\u00f3 que los homogeneizados producidos por el m\u00e9todo de descompresi\u00f3n ten\u00edan c\u00e9lulas libres, mientras que grupos numerosos de c\u00e9lulas fueron observadas en el mortero y homogeneizado de tubo. La microscop\u00eda electr\u00f3nica de los gr\u00e1nulos microsomales mostr\u00f3 que las part\u00edculas eran m\u00e1s peque\u00f1as y m\u00e1s uniformes en tama\u00f1o en el m\u00e9todo de descompresi\u00f3n. En resumen, estos autores afirman que el m\u00e9todo de descompresi\u00f3n de nitr\u00f3geno fue m\u00e1s eficiente y probablemente menos variable que el mortero de PTFE y los m\u00e9todos de tubo de vidrio.<\/p>\n Comparaci\u00f3n con m\u00e9todos de mortero y tubo. <\/strong>En una aplicaci\u00f3n reciente en el Hospital de Investigaci\u00f3n de Administraci\u00f3n de Veteranos en Chicago, un homogeneizado que hab\u00eda requerido ocho horas para producirlo con mortero y tubo, se prepar\u00f3 en quince minutos con un recipiente de rotura celular. En otro laboratorio se homogeneizan hasta 12 kilogramos de cerebro por d\u00eda con un recipiente de rotura celular.<\/p>\n Wallach y sus asociados (5) <\/strong>han usado el m\u00e9todo de descompresi\u00f3n de nitr\u00f3geno para obtener el fraccionamiento de c\u00e9lula completa con m\u00ednimo da\u00f1o nuclear. Trabajando con C\u00e9lulas de Carcinoma de Ehrlich Ascitis con un buffer de 0.0002M acetato de magnesio, han estudiado la distribuci\u00f3n celular de fosfol\u00edpidos. Wallach ha publicado muchos otros papeles en los que la t\u00e9cnica de descompresi\u00f3n ha sido utilizada para preparar las membranas celulares.<\/p>\n Varios laboratorios comerciales han encontrado que la t\u00e9cnica de descompresi\u00f3n de nitr\u00f3geno es extremadamente eficaz para liberar el virus de huevos fertilizados. Este m\u00e9todo puede ser ampliado para producci\u00f3n comercial usando recipientes de rotura m\u00e1s grandes que son ofrecidos para tal efecto por Parr.<\/p>\n Fraser (7) en 1951 <\/strong> public\u00f3 algunos de los primeros estudios sobre la descompresi\u00f3n de nitr\u00f3geno y su efecto sobre la E Coli. El trabajo de Fraser fue limitado debido a que su recipiente estaba limitado a una presi\u00f3n de operaci\u00f3n 900 psi. Sin embargo, \u00e9l fue capaz de obtener un 75% la ruptura en una sola vez y m\u00e1s del 90% ruptura en dos pasos sucesivos usando E Coli recolectada durante la fase de crecimiento logar\u00edtmico. Los resultados con otras bacterias y organismos con paredes celulares resistentes han sido mixtos.<\/p>\n Hay varias formas en las que las c\u00e9lulas bacterianas con paredes resistentes pueden ser tratadas para facilitar su rotura por el m\u00e9todo de descompresi\u00f3n de nitr\u00f3geno. Estas incluyen: (1) recoger las c\u00e9lulas durante una fase temprana de crecimiento antes de que se desarrolle la pared completa, (2) cultivar las c\u00e9lulas en presencia de un agente que inhibe la formaci\u00f3n de la pared celular, (3) usando una lisozima para debilitar la pared antes de su procesamiento, o (4) utilizar un pre tratamiento mec\u00e1nico para debilitar las paredes de las c\u00e9lulas antes de aplicar el m\u00e9todo de descompresi\u00f3n de nitr\u00f3geno. Aunque estas t\u00e9cnicas se han aplicado con \u00e9xito a muchas bacterias con paredes celulares pesadas, no son igualmente efectivos para la levadura, hongos, esporas y c\u00e9lulas similares con paredes muy pesadas o duras. Generalmente se requieren vigorosos m\u00e9todos mec\u00e1nicos para romper la estructura celular de estos materiales de paredes duras, ya que generalmente no responden bien al tratamiento por el m\u00e9todo de descompresi\u00f3n de nitr\u00f3geno.<\/p>\n Loewus y Loewus (10) <\/strong>han publicado una serie de documentos en los cuales describen la aplicaci\u00f3n de los procedimientos de rotura con nitr\u00f3geno a c\u00e9lulas de plantas y c\u00e9lulas de tejidos de plantas cultivadas. Tambi\u00e9n reportan un \u00e9xito considerable en la ruptura de diatomeas por este m\u00e9todo.<\/p>\n Muchas Aplicaciones El m\u00e9todo de descompresi\u00f3n de nitr\u00f3geno est\u00e1 particularmente bien adaptado para el tratamiento de c\u00e9lulas de mam\u00edferos y otras limitadas por membrana. Tambi\u00e9n se ha utilizado con \u00e9xito para el tratamiento de las c\u00e9lulas de plantas, para liberar el virus de huevos fertilizados y para el tratamiento de bacterias fr\u00e1giles. No se recomienda […]<\/p>\n","protected":false},"author":1,"featured_media":37722,"parent":331,"menu_order":0,"comment_status":"closed","ping_status":"closed","template":"product-narrow.php","meta":{"_acf_changed":false,"footnotes":"","_links_to":"","_links_to_target":""},"class_list":["post-2569","page","type-page","status-publish","has-post-thumbnail","hentry"],"acf":[],"yoast_head":"\nPreparaci\u00f3n de Vacuna<\/h4>\n
C\u00e9lulas Bacterianas<\/h4>\n
C\u00e9lulas de Plantas<\/h4>\n
\nReferencias<\/h3>\n
\n\n
\n (1)<\/td>\n Hunter, M. J. and Commerford, S. L., 1961, \u201cPressure homogenization of mammalian tissues.\u201d Biochim. Biophys. Acta, 47:580- 6.<\/td>\n<\/tr>\n \n (2)<\/td>\n Dowben, R. M., Gaffey, T. A. y Lynch, P. A., 1968. \u201cIsolation of liver muscle polyribosomes in high yield after cell disruption by nitrogencavitation.\u201d Cartas FEBS, Vol. 2, N\u00b0 1, pages 1-3.<\/td>\n<\/tr>\n \n (3)<\/td>\n Dowben, R. M., Lynch, P. M., Nadler, H. C. y Hsia, D. Y., 1969. \u201cPolyribosomes from L. Cells.\u201d Exp. de Investigaci\u00f3n con C\u00e9lulas, 58:167-9.<\/td>\n<\/tr>\n \n (4)<\/td>\n Short, C. R., Maines, M. D. y Davis, L. E., 1972. \u201cPreparation of hepaticmicrosomal fraction for drug metabolism studies by rapid decompressionhomogenization.\u201d Proc. Soc. Exper. Biol. Med., 140:58-65.<\/td>\n<\/tr>\n \n (5)<\/td>\n Wallach, D. F. H., Soderberg, J. y Bricker, L., 1960. \u201cThe phospholipides ofEhrlich and ascites carcinoma cells composition and intracelfulardistribution.\u201d Cancer Research, 20:397-402.<\/td>\n<\/tr>\n \n (6)<\/td>\n Manson, L. A., Foshi, G. V. y Palm, J., 1963. \u201cAn association oftransplantation antigens with microsomal pipoproteins of normal andmalignant mouse tissues.\u201d J. Cell and ComD. Physiol., 61:109-18.<\/td>\n<\/tr>\n \n (7)<\/td>\n Fraser, D., 1951. \u201cBursting bacteria by release of gas pressure.\u201d Nature, 167:33-4.<\/td>\n<\/tr>\n \n (8)<\/td>\n Avis, P. J. G., 1967. \u201cIn subcellular components, preparation andfractionation.\u201d (Ed. Birnie, G. D. and Fox, S. M.) Chapt. 1, Pressurehomogenization of mammalian cells. Published by Plenum Press, Nueva York.<\/td>\n<\/tr>\n \n (9)<\/td>\n Manson, L. A., 1972 \u201cExtraction of membranous transplantation antigens bypressure homogenization.\u201d (Ed. Kahan, B. D. y Reiifeld, R. A.) Chapt.9,oyransplantation Antigens. Published by Academic Press, Nueva York.<\/td>\n<\/tr>\n \n (10)<\/td>\n Loewus, M. W. y Loewus, F., 1971. \u201cThe isolation and characterization ofd-glucose 6-phosphate cycloaldolase (NDAdependent) from acerpseudoplatanus L. cell cultures. Plant Physiol. (1971) 48:255-260.<\/td>\n<\/tr>\n<\/tbody>\n<\/table>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"